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如何在-196℃液氮罐中復蘇細胞

時間:2019-10-31 08:47來源:未知 作者:ydgmve2020yyx 點擊:
細胞復蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。 MVE液氮罐
細胞復蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。MVE液氮罐

  一、 實驗前準備:

  1、將水浴鍋預熱至37℃

  2、用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。

  3、在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等等。

  二、取出凍存管:

  1、根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。

  2、從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。

  三、迅速解凍:

  1、迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。

  2、約1-2min后凍存管內液體完全溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內。

  四、平衡離心:

  用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min

  五、制備細胞懸液:

  1、吸棄上清液。

  2、向離心管內加入10ml培養液,吹打制成細胞懸液。

  六、細胞計數:

  細胞濃度以5×105/ml為宜。

  七、培養細胞:

  將復合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內,將培養瓶放入37℃5%CO2的培養箱內2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續培養培養,換液的時間由細胞情況而定。

  初學者易犯錯誤:

  1、水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。

  2、水浴鍋內凍存管太多,導致傳熱不佳,使融化時間延長。

  3、離心前忘記平衡,導致離心機損壞和細胞丟失。

  4、一次復蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導致細胞交叉污染。MVE液氮罐
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